BCIP NBT Protocolos

Nitroblue tetrazólio , NBT ou , é um produto químico usado em bioquímica e imunologia para a detecção de uma enzima denominada fosfatase alcalina . Os cientistas também utilizar o composto de condições de diagnóstico do sistema immunodefense , tais como a doença granulomatosa crónica . BCIP significa fosfato de 5 -bromo – 4 – cloro – 3 – indolilo . Este composto químico é geralmente utilizado em conjunto com NBT para detectar a fosfatase alcalina , através de uma série de protocolos . BCIP /NBT fosfatase alcalina Solução de Substrato

Durante este protocolo , os cientistas preparar uma solução com BCIP , NBT , levamisol eo buffer enzima fosfatase alcalina com pH 9.5. Tampão AP contém tris ( hidroximetil ) aminometano , cloreto de magnésio , o Tween detergente polissorbato 20 e cloreto de sódio . A solução é incubada à temperatura ambiente durante 24 horas e é , então, disponível para uso.

Detecção de ARNm com fosfatase alcalina

Detecção de ARNm com fosfatase alcalina é um protocolo utilizado para estudar o ARNm de ácidos nucleicos e de ADN em embriões animais . Durante este procedimento , BCIP /NBT é utilizado como um substrato para a enzima fosfatase alcalina . BCIP /NBT é adicionado para os embriões que são depois lavadas duas vezes em tampão de coloração da fosfatase alcalina . Sítios ácidos nucleicos aparecem em roxo.

Eletroforese e Western Blotting

Durante este protocolo , os técnicos de separar e identificar os componentes de proteínas, utilizando aparelho de eletroforese em gel e uma técnica chamada de transferência de Western , que requer o uso de uma peça de equipamento que contém uma membrana de nitrocelulose e de anticorpos específicos . Após electroforese padrão , os técnicos executar o protocolo de transferência de Western , incubando as membranas durante 30 minutos numa solução tampão e à temperatura ambiente . O anticorpo p47 – phox é adicionado e incubado durante uma hora . Anticorpo conjugado com fosfatase alcalina é adicionada , e depois de uma hora , também BCIP /NBT . A reacção é parada após 15 minutos de incubação por lavagem da membrana com água .

Isolamento e Diferenciação de Células Medaka

medaka é um peixe pequeno que produz ovos diariamente e é amplamente utilizado na pesquisa com células -tronco embrionárias. De acordo com Kursad Turksen em “Protocolos células-tronco embrionárias : Isolamento e caracterização , ” Medaka ovos são incubados em meio embrião em 78,8 graus Fahrenheit durante sete dias. Os embriões são então lavados em solução salina tamponada com fosfato , fixada em uma mistura de metanol – acetona e corados com BCIP /NBT . As amostras são então mantidos no escuro durante 24 horas a 82,4 graus centígrados . As células cromossomos são então observadas ao microscópio.