Passos de purificação de proteínas

Cada função em cada organismo vivo é determinada pela função das suas proteínas . Purificar uma proteína permite cristalizar a proteína pura , a fim de descobrir diferentes sequências de aminoácidos . No campo das ciências médicas , este é um processo muito valioso que isola e identifica o que a proteína está a fazer , em qualquer processo biológico . Purificação de proteínas também é importante para a descoberta e compreensão das relações evolutivas entre organisms.Things você precisa
Reagente de Ensaio proteína Bio- Rad
centrífuga
tubos de centrifugação
dois sistemas cromatográficos Página 2 Chromatogprahic bombas
Fraction Collector
Espectrômetro
componentes do tampão
dispositivo Filtro
soluções de SDS-PAGE
Refratômetro
pipetadores
coletor Fraction tubos
dicas Pippet
Concentrators tubos Eppendorf

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Obtenção da proteína
1

Realizar um teste com base nas diferenças únicas no proteína separada de outras proteínas. Este teste é chamado de " Ensaio " e que é necessário para usar quando encontrar a proteína específica .
2

Separar as diferentes estruturas da célula para se obter a estrutura que tem a mais elevada concentração de proteína em particular o seu .
3

Diminuir a densidade da proteína para ajudar a restringir a pesquisa para a proteína exato que você está procurando. Proteínas todos variar em densidade . Desenvolver um homogeneizado , rasgando a membrana celular por centrifugação. O material denso menos , o que está mais afastada da parte inferior do tubo de centrifugação , é chamado o " sobrenadante " e tem de ser obtido e colocado na centrifugadora novamente --- mas a uma velocidade muito mais rápida . Este , por sua vez , cria um novo sobrenadante . O processo repetitivo de colocar o sobrenadante na centrifugadora é chamado de centrifugação diferencial .
Purificar a proteína
4

Adicionar sal com a proteína . Este identifica diferentes níveis de solubilidade , o que permite isolar as diferentes subunidades e as estruturas .
5

Use diferentes tipos de cromatografia, para se isolar ainda mais a concentração mais elevada da proteína . (Consulte Recursos ).
6

Use uma análise SDS -PAGE para descobrir o quão preciso seu plano de purificação de proteínas era.