Como preparar um Cocktail Inibidor de Protease

Os inibidores de protease são enzimas que inibem as ações de proteases , que são certas enzimas que matam proteínas dentro das células. Existem várias proteases que têm como alvo proteínas diferentes . Portanto , para preservar a funcionalidade de proteínas após a lise celular , a combinação , ou cocktails , de inibidores de protease é utilizada . Estas informações estão disponíveis em solução, tablet ou em pó form.Things você precisa
PMSF
Bestatina
aprotinina
Leupeptin
Pepstatin
EDTA pH ~ 8
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Inibidores da Protease
1

Faça aprotinina , Leupeptin e Pepstatin em concentraions ações de 100uM ( micromolar ) .

aprotinina está disponível em forma de solução em uma concentração de 100 mM estoque .

Para fazer 1 ml ( mililitros) de 100uM , dissolver 1ul ( microlitro ) em 999ul de 1X PBS ( solução de tampão fisiológico ) .

Leupeptina está disponível como um pó . O peso molecular de Leupeptin é 475,6 . Dissolver 100ug (microgramas) de pó em 2 ml de água para fazer a concentração estoque de 100uM .

Para fazer Pepstatin , dissolver 100ug de pó pepestatina em 1,45 ml de água para fazer uma concentração estoque de 100uM .

Todos estes podem ser misturados entre si ou armazenadas individualmente a menos 80 graus Celsius.
2

Faça PMSF (fluoreto de sulfonil Fenilmetil) em estoque 100mm. PMSF vem na forma de pó. O peso molecular de PMSF é 174,19 . Dissolve-se 10 mg de PMSF em 572 ul de 100 por cento de etanol e armazenar a 4 graus Celsius . Ele é sensível à luz e deve ser armazenado em escuro.

Este é adicionado ao tampão de lise imediatamente antes da utilização .
3

Misture as proteases juntos nas concentrações necessárias. Geralmente eles são diluídos por um fator de 100 para uso.