Como sincronizar células em cultura

Para entender a base molecular e bioquímica de crescimento celular e divisão, você precisa estudar mecanismos de regulação do ciclo celular . Estudos de ciclo celular envolvem principalmente a sincronização ou coordenação de células em uma fase específica . A sincronização das células é um método de trazer células em diferentes fases de uma fase particular da divisão celular . Existem muitos métodos estabelecidos por cientistas em laboratório para sincronizar as células em fases específicas do ciclo celular . Os métodos mais comuns são a privação de soro de células por um período de tempo ou a utilização de agentes farmacológicos tais como Nocodazole . Qualquer um destes métodos proporciona as células para parar numa fase específica do ciclo celular . Instruções
Serum Fome
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Placa suas células em meio de cultura de células regulares suplementado com 10 por cento de soro fetal bovino por 12 a 14 horas e deixar as células atribuem às placas de cultura de tecido .
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Uma vez que as células têm ligado , remova a mídia e lavar as células com 10 ml de solução tampão fosfato .
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Add new media crescimento suplementado com 0,2 por cento fetal de soro bovino para 16-48 horas. O período de tempo depende do tipo de células que você está usando. Algumas células requerem menos tempo, enquanto outros precisam de mais tempo. Este estágio é o período de fome soro.
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Após o período de tempo definido é longo , lavar as células novamente com 10 ml de solução tampão fosfato .
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Substitua o meios de crescimento de idade suplementado com 10 por cento de soro fetal bovino . As células são agora sincronizados e está pronto para a sua experiência .
Nocodazol tratamento
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Placa suas células em meio de cultura de células regulares suplementado com 10 por cento de soro fetal bovino para 12 -14 horas e deixar as células atribuem às placas de cultura de tecidos.
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Remova a mídia e lavar as células com 10 ml de solução tampão fosfato .
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Adicionar meio de crescimento normal suplementado com 10 por cento de soro fetal bovino e 100ng/ml de nocodazol às células durante 12 horas em 37 graus Celsius incubadora .
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Observar as células ao microscópio após 12 horas de tratamento . As células devem ser arredondamento para cima e ficar separado da placa de cultura .
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Coletar as células tocando na placa de cultura e pipetando o meio para cima e para baixo várias vezes . Transferir o meio contendo as células para um tubo de polipropileno de 50 ml
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Centrifugar as células a 100 xg durante 10 minutos . Desprezar o sobrenadante . Lave as células em 10 ml de solução de fosfato tamponada e centrifugar novamente a 100 x g durante 10 minutos .
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Suspender as células em meio de crescimento normal suplementado com 10 por cento de soro fetal bovino . As células estão prontas para a sua experiência .