Como corrigir um vírus para Microscopia

Virologia é o estudo dos vírus. Os vírus são tão pequenos que deve ser visto sob um microscópio eletrônico. Coloração negativa deve ser usado para visualizar os vírus, tecidos ou células com um microscópio eletrônico . Você vai usar o mesmo tipo de fixação de protocolos se você estiver usando um microscópio eletrônico de varredura ou microscópio eletrônico de transmissão . O glutaraldeído é o fixador primário mais comumente usado em microscopia eletrônica. Um protocolo pode ser usado para examinar um único vírus e contar a quantidade de vírus present.Things Você vai precisar Página 2 tubos Eppendorf
Formaldeído
Glutaraldeído
água deionizada
Pipeta
tubos pipeta
medidor de PH
hidróxido de sódio Página 2 por cento de ácido fosfotúngstico aquosa
suspensão de vírus
Ethanolamine
fosfato de sódio salina
Electron esferas de látex microscopia (opcional)
Laboratório -Grau água destilada
albumina de soro bovino
grade microscópio eletrônico
Filtro de papel
caixa de grade Laboratório
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pipetas grau 1 Laboratório medir pequenas quantidades de líquido com precisão.

Descontraia todos os produtos químicos que utilizam um frigorífico laboratório de uso geral estabelecida em 4 graus Celsius. Adicione o fixador em um tubo Eppendorf de 10 por cento pela adição de formaldeído e glutaraldeído a 5 por cento de água desionizada . Misturar bem com a pipeta .
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Preparar NaOH 1 N por adição de 40,00 g de hidróxido de sódio para o laboratório de água destilada para fazer uma quantidade de 1 litro. Preparar a solução de coloração , utilizando uma pipeta para adicionar a uma solução de NaOH 1N a 10 microlitros ( ul ) de 2 por cento de ácido fosfotúngstico aquosa até obter um pH de 7,3 . Meça seu pH com um medidor de pH grau de laboratório .
3 marcar sempre seus tubos com um marcador permanant antes do uso.

Adicionar 100 ul de suspensão do vírus a um tubo de Eppendorf , medindo-a com uma pipeta . Fixe a suspensão de vírus pela adição de 10 ul de 10 por cento e 5 por cento formaldeído glutaraldeído fixador.
4 de látex esferas fornecer um ponto de referência , contando vírus.

Combine em um tubo Eppendorf 10 ul de suspensão de vírus , 10 ul de esferas de látex e 10 ul de água destilada contendo 1 por cento de BSA , ou a albumina de soro bovino . Deixe as esferas de látex , se você não precisa contar os vírus . Pipetar a solução 30 vezes , utilizando a técnica de fluxo suave para evitar danificar os vírus.
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Aplique a solução para a grade microscópio eletrônico, e deixe por 30 segundos a um minuto . Utilizar um pedaço de papel de filtro para retirar fluido adicional da parte lateral . Você quer uma película fina e uniforme.
6 microscópios de luz usam slides, mas microscópios eletrônicos usam uma grade .

Adicionar 6-10 ul do ácido fosfotúngstico aquosa a 2 por cento imediatamente à rede microscópio. Deixe-a por 30 segundos e, em seguida, desenhe -o com um pedaço de papel de filtro. Certifique-se de formação de um filme até ao desenhar fora da solução.
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Coloque a grade na caixa de grade, e permitir que a lâmina secar ao ar por várias horas ou durante a noite . Suas vírus agora são capazes de ser visto .
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