Como calcular RNA Concentração

Quantificar a sua amostra de RNA , medindo a absorção de luz ultravioleta (UV). Um espectrofotômetro nano -drop vai usar apenas um ou dois microlitros de sua amostra , o que você pode recuperar. Outros espectrofotómetros exigem uma amostra muito maiores . O coeficiente de extinção para os nucleótidos em um comprimento de onda UV de 260 nm num percurso de luz de 1 cm é 20 Com base nesta coeficiente de extinção , a absorvância de 40 & micro ; g /ml de ARN de acordo com as mesmas condições, é um . Usando essas informações, você pode calcular a concentração de seu RNA sample.Things Você vai precisar de
espectrofotômetro
Calculadora
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Faça uma diluição , se necessário, da sua amostra . Uma diluição padrão para uma microcuvete é 1:40. Faça desta diluição por adição de 2 & micro ; L amostra de RNA para 78 & micro ; . L água estéril
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Siga os protocolos de seu espectrofotômetro especial para calibrar o aparelho utilizando um espaço em branco e , em seguida, determinar a densidade óptica do seu amostra em um comprimento de onda UV de 260nm
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Multiplique a absorção da sua amostra por seu fator de diluição por 40 & mu ; . g RNA /mL. A equação seria: "A concentração de RNA ( & micro ; g /ml ) = ( OD260 ) x ( fator de diluição ) x (40 & micro ; g de RNA /ml) /(1 OD260 unidade )" ( Hofstra.edu ) Por exemplo : Se você diluída a sua amostra por 1:40 e sua leitura de absorbância foi de 0,08 , você iria multiplicar 0,08 x 40 x 40 = 128 & micro ; g /ml = 0,13 & micro ; g /& mu ; L
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Descobrir a pureza de sua amostra , tomando outra leitura da absorvância a 280 nm de comprimento de onda UV. A razão OD 260 /OD 280 vai indicar se - e em que nível - sua amostra está contaminada com proteínas ou fenol . Um resultado de 1,8 a 2,0 indica RNA qualidade.