Como a detecção de mutações em Gel Electrophoresis
A electroforese em gel é um componente importante de biologia molecular , uma vez que permite ao utilizador visualizar o ADN e ARN , que são os materiais genéticos de vida . Cientistas usam essa tecnologia para estudar a genética de inúmeras maneiras , e em quase todos os experimentos envolvendo o material genético . Ele envolve a execução do material genético através de uma matriz sólida que permite que o material genético de forma a separar de acordo com propriedades diferentes, tais como o tamanho e charge.Things eléctricos você precisa
gel de agar ( também conhecido como agarose )
máquina Eletroforese
buffer
Carregando devido
Pipettes e dicas
Ladder controle
amostra de DNA purificado ( contendo apenas uma seção do DNA conhecida)
Mostrar Mais instruções
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Criar a matriz de gel , seguindo as instruções na embalagem da mídia de gel. A maioria dos géis são feitas entre 0,7 % e 2 % de agarose . A menor concentração de ágar final vai dar uma boa separação dos fragmentos de DNA entre 5 e 10kb , enquanto um gel 2% irá mostrar uma boa separação de fragmentos menores (0,2 – 1 kb) . Quando a agarose é arrefecida até ligeiramente acima de endurecimento , adiciona-se brometo de etídio para o gel a uma concentração de 10mg/mL . Agite para misturar antes de derramar , tomando cuidado para não criar bolhas. Certifique-se de inserir os pentes enquanto o gel é suave para que os poços são criados para as amostras de DNA . Vamos gel endurecer por pelo menos 30 minutos antes de colocar as amostras .
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Faça solução tampão. Um tampão padrão de electroforese em gel é Tris – Borato- EDTA , que pode ser preparada por dissolução de 218 g de base Tris , ácido bórico e 110 g 9,3 g de EDTA em 1.9L de água destilada . Use NaOH para ajustar cuidadosamente o pH para 8,3 . Isto dá uma solução 10X . Dilui-se para fazer um lote de solução de 0,5 x para utilizar na máquina de electroforese .
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Coloque o gel na máquina de electroforese , e cobrir com uma solução tampão .
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Mix 2 – . . 4μL de cada amostra de DNA com cerca de 5 mL de corante
5 carga
primeiro poço com o marcador e corante
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Começando com o segundo bem, começar a carregar cada amostra. Terminar com a faixa final, carregado com o mesmo marcador .
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Feche a máquina de gel e ligar a energia . Execute o gel em 5V/cm .
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Desligue a fonte de alimentação quando corante carregamento chegou perto do outro lado do gel. Tenha o cuidado de monitorar o gel para que o corante de carregamento não for executado fora da outra extremidade do gel.
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Remover gel de tanque e vista em um quarto escuro com uma luz UV.
10
Nota o marcador em escada que é o tamanho do fragmento de ADN de tipo selvagem ( não mutante ) está previsto para ser . Se a amostra for pura, a banda correspondente das amostras é do tipo selvagem e todas as outras bandas representam mutantes.
