O que é o TA Cloning

? TA clonagem é um método simples e conveniente de subclonagem Polymerase Chain Reaction (PCR) produtos. “TA” é a abreviação de ” timina ” e ” adenina “. Esta técnica utiliza a capacidade de clonagem de timina para hibridizar para adenina na presença de ligase . As enzimas de restrição não são usados ​​, ao contrário do método tradicional de subclonagem . Em vez disso , os produtos de PCR são amplificados utilizando Taq polimerases enzimas . Método

O método de clonagem TA utiliza a actividade de transferase terminal de determinado ácido desoxirribonucleico ( ADN) , tais como polimerases de Taq polimerase . Enzimas polimerase Taq não têm atividade de revisão e, preferencialmente, adicionar um único , três prime- A ( 3′- A) saliência para cada extremidade do produto da PCR.

Um vector de clonagem linear com single, três prime- T ( 3′ – T ) pende um chamado T – vector é utilizado para clonar o produto de PCR num vector de plasmídeo . O produto da PCR é misturado com este vetor em grande proporção .

DNA ligase (T4 ligase ) é adicionado à mistura , que permite que os dois produtos de hibridizar e junte-se .

Vantagens e Desvantagens

clonagem TA é um método conveniente para subclonagem produtos de PCR no vector linearizado , e é muito mais simples e mais rápido do que os métodos tradicionais de subclonagem . Uma vez que este método não utiliza enzimas de restrição , produtos sem locais de enzimas de restrição podem ser clonados .

Uma desvantagem é que os kits de clonagem de TA são muito caros e, portanto , a sua utilização é limitada . Além disso , não há a clonagem direccional; assim probabilidade de clonagem em uma direção oposta é maior .

TA Kits Clonagem

Vários fabricantes vende kits de clonagem de TA. Alguns são Invitrogen, QIAGEN e Premier Biosoft .