Como traduzir ARNm em proteína
Os nossos genes codificam proteínas que são usadas em nossas células para realizar funções , tais como o metabolismo de energia , a biossíntese e a divisão celular . As proteínas são construídos a partir de aminoácidos ligados por ligações peptídicas . “Conversão ” é um processo pelo qual um ácido ribonucleico mensageiro ( ARNm ) , que é basicamente uma cópia do gene do indivíduo , é utilizado como um molde para construir uma proteína . Na natureza, a tradução da proteína acontece dentro de uma célula viva , mas os biólogos moleculares têm aprendido a produzir proteínas no laboratório. Esta técnica é utilizada para a rápida identificação de produtos de genes , estudos de dobramento de proteínas , estudos de mutação , e studies.Things funcionais que você precisa
seu mRNA
Coelho reticulócitos Sistema Lysate
Aminoácidos Mistura menos Metionina
mistura de aminoácidos menos Leucina
RNasin
Transcend tRNA
Pipetas e dicas
Microcentrífuga tubo
Show Mais instruções
1
Combine todos os seus componentes em um tubo de microcentrífuga : Pipetar 35 microlitros lisado de reticulócitos de coelho Sistema , 0,5 microlitros das misturas de aminoácidos , um microlitro de RNasina , 2 microlitros de ARNm e 1 microlitro de ARNt em conjunto , e misturar . O coelho de reticulócitos Lysate sistema inclui todas as moléculas que são encontradas dentro de nossas células e necessários para a tradução , incluindo os ribossomos e fatores de iniciação . Esta etapa irá preparar tudo pronto para a tradução . Sua molécula de mRNA atribui a um ribossomo , e os fatores de iniciação montar. Moléculas chamadas tRNAs estão associados com seus aminoácidos e está pronto para construir a proteína.
2
Aqueça a mistura de reacção a 30 graus Celsius. A tradução será iniciado durante esta etapa. A mensagem do RNAm é ” lida” pelo ARNt . Cada tRNA transporta um aminoácido , e estes aminoácidos são unidos em conjunto para formar a proteína .
3
esperar 90 minutos para que a tradução de proceder . Os ARNt manter trazer novos aminoácidos de acordo com a mensagem de ARNm . Uma vez que o ARNm é totalmente lido , a tradução termina e a proteína está pronto .
4
Purificar sua proteína por SDS -PAGE . Ele está pronto para testes funcionais .
