Como medir a temperatura ideal para uma enzima
Uma enzima é uma proteína que catalisa ( aumenta a taxa de ) reações químicas. A temperatura óptima da maioria das enzimas, ou a temperatura a que enzimas de melhor facilitar as reacções , é entre 35 e 40 graus Celsius . O aumento da temperatura dentro desta janela aumenta a taxa de reacção , porque excita moléculas e aumenta a taxa a que as enzimas /reagentes colidem e reagem para formar o produto . No entanto , o aumento da temperatura demasiado pode desnaturar a enzima e evitar que ele funcione em todos.
Determinar a temperatura óptima da enzima por aquecimento a reacção por montantes infinitesmal e levando as pequenas amostras da reação , para determinar quando a taxa máxima de produção de occurs.Things produtos que você precisa
Enzyme
Substrato
kit Ensaio para produto
Scintillation frasco
taça
placa de aquecimento
Termômetro
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Selecione um método. Determine como você está indo para medir a concentração de seu produto em vários pontos do experimento. Por exemplo, você pode medir a concentração de muitos produtos usando um espectrofotômetro e calcular a concentração a partir da absorvância , ou medindo a fluorescência e cálculo de concentração de fluorescência.
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Configure sua experiência. Colocar os reagentes e enzima em um pequeno recipiente com uma tampa , tal como um frasco de cintilação . Reação vai começar. Colocar o frasco de cintilação em um copo grande de água à temperatura ambiente . Colocar o copo numa placa de aquecimento . Coloque um termômetro dentro do copo. Isso permite que você para medir a temperatura da reação em vários pontos .
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Tomar uma amostra de 100 microlitros da reação à temperatura ambiente , cerca de 25 graus Celsius. Vire a placa de aquecimento por diante. Em várias temperaturas entre 30 e 40 graus Celsius ( 30,5, 31 , 31,5 , etc ) ter 100 amostras microlitro de sua reação .
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Determinar a concentração de seu produto em cada temperatura. Quando a temperatura sobe acima de 40 graus Celsius , será exibida uma diminuição da taxa à qual o substrato é convertido em produto , porque a enzima é desnaturada . O ponto em que o produto está sendo produzido pela taxa máxima é o ponto em que a temperatura está no seu melhor .
