Como solucionar o processo de Eletroforese

Eletroforese é um método de separar fragmentos de DNA ou proteína por tamanho. O gel é colocado numa caixa e sujeitas a electroforese em cargas opostas . ADN portador de uma carga negativa uniforme , e por isso naturalmente migra para carga positiva e de distância a partir de cargas negativas . Os fragmentos menores migram mais , porque eles têm um tempo mais fácil manobrar através da matriz de gel. As proteínas que não têm cargas ou formas uniformes , e, portanto , devem primeiro ser submetido a um detergente , tal como SDS , dodecilsulfato de sódio ou . O detergente desenrola as proteínas e dá-lhes um uniforme charge.Things negativos que você precisa

Eletroforese equipamentos e reagentes padrão

máquina PCR reação em cadeia da polimerase ou microbiana vetor de amplificação

reagentes padrão SDS -PAGE

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Troubleshooting DNA ou proteína eletroforese

1

lave o equipamento de eletroforese . Execute novamente o experimento. Se isso corrige o problema , em seguida, o equipamento ou as luvas do técnico pode ter sido contaminado com uma enzima que degrada e do produto, ou de outra substância que inibia as reações .

2

Se o experimento falhar novamente, executar outro gel de eletroforese utilizando diferentes equipamentos de eletroforese . Se isso corrige o problema , em seguida, descartar o equipamento defeituoso .

3

Se o experimento ainda não funcionar, então execute novamente o experimento com diferentes reagentes, tais como buffer, poliacrilamida, corante e assim por diante. Se isso corrige o problema , um dos reagentes de eletroforese podem ter sido contaminados ou não com defeito

Procedimentos específicos para DNA ou proteínas

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Repita os procedimentos – . PCR , amplificação de bactérias , etc – que rendeu a amostra de DNA , em primeiro lugar , se você está recebendo um gel branco. Se você está recebendo bandas do tamanho errado, então refazer as etapas da digestão; por exemplo , o uso de enzimas de restrição , para isolar o fragmento de ADN desejado; unir o plasmídeo receptor , se houver e ligar os produtos . Se esta produz os resultados corretos , então o problema era com os procedimentos que produziram a amostra de DNA; não com o gel de eletroforese.

5

Repita a experiência usando DNA intacto . Se isto produz os resultados previstos , em seguida, o problema era de digestão com as enzimas ou procedimentos .

6

Repita os procedimentos , tais como a lise das células , e assim por diante , que produziram a proteína de amostra , em primeiro lugar , Se você está recebendo um gel branco.

7

Se você está recebendo bandas de proteínas do tamanho errado, então refazer os passos de SDS , tendo a certeza de aquecer a amostra para permitir que o SDS para ligar . Se esta produz os resultados corretos , então o problema era com os procedimentos que produziram a amostra , não com o gel de eletroforese.

8

Repita a experiência sem o SDS . Se isso produz os resultados previstos , então o problema era com os procedimentos de SDS ou associados .