Como elaborar uma contagem de células viáveis
Ao fazer a pesquisa envolvendo células animais vivos, é muito importante para monitorar a saúde da população de células . Afinal de contas, é o propósito da maioria das pesquisas de células para determinar o efeito de determinados tratamentos ou microrganismos em células vivas . Pode-se determinar a percentagem total de células viáveis na cultura , utilizando uma técnica chamada de exclusão com Trypan Blue contagem . Azul de tripano é um corante que apenas é absorvida por células mortas , por isso, quando ele é adicionado a uma amostra de células apenas as mortas tornar azul . De lá, é apenas uma questão de contar as células e calcular as percentages.Things você precisa
população celular
microscópio de luz
Trypan azul
Micropipetter
hemocitômetro
capa escorregar
Visualizar Mais instruções
Preparar as células para visualização
1
Use um micropipetter misturar 100 microlitros da suspensão de células com 100 microlitros de corante Trypan Blue .
2
Adicionar 25 microlitros da mistura resultante para cada um dos poços em seu hemocitômetro .
3
Coloque a lamínula sobre os poços do hemocitômetro .
Realize o celular Contagem
4
Coloque o hemocitômetro em seu microscópio de luz e vista em 100 vezes de ampliação.
5
contar o número de células claras , que vivem em um espaço de um milímetro quadrado demarcada em seu hemocitômetro . Contar o número total de células no mesmo espaço . Divida o número de células vivas pelo número total de células e multiplique por 100 para determinar a porcentagem de células que são viáveis.
6
Repita o passo anterior para vários espaços milímetros mais um quadrados. Calcule a porcentagem viável média somando-se seus cálculos percentuais resultantes e dividindo pelo número total de cálculos. Este número deve ser uma razoável estimativa do percentual total de células na população que são viáveis.
