Como fazer gel de poliacrilamida
Embora você possa usar géis de poliacrilamida para separação de DNA, eles são mais adequados para a separação e caracterização de proteínas . Eles são largamente utilizados para estudar o peso molecular, carga , estrutura e pureza de proteínas . A mobilidade electroforética de proteínas permite que eles viajam através da rede de polímeros de acrilamida quando a corrente é aplicada . Proteínas separar de acordo com suas size.Things você precisa
placas de vidro
Comb
Spacer
Grampos
Seringa
Luvas de segurança
150 mL frasco
26,6 mL de 29 % de acrilamida , mais 1% de N , N- metilenobisacrilamida
52,7 mL de água
20 mL de 5X Tris /BorateEDTA ( TBE ) Tampão
0,7 mL de 10% de amônio Persulfate
35 microlitros de TEMED
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1
Coloque luvas . Limpe e seque a placas de vidro , pente e espaçadores.
2
Coloque o prato maior sobre uma superfície limpa e seca. Coloque os espaçadores em ambos os lados e cobrir com placa menor . Alinhe cuidadosamente as placas com os espaçadores em dois lados e no fundo. Fixar os três lados das placas de vedação e mantê-los juntos .
3
Calcular a quantidade do volume de gel é necessária para o tamanho de placas de espessura e de espaçadores .
4
Determinar por cento da solução de poliacrilamida necessário para a sua experiência. Para 100 ml de um gel de poliacrilamida a 8 % , mistura de 26,6 mL de 29 % de acrilamida , mais 1% de N , N – metilenobisacrilamida , 52,7 mL de água , 20 mL de 5x TBE e 0,7 mL de 10 % de persulfato de amónio em um pequeno frasco . Adicionar 35 microlitros de TEMED à solução e misturar suavemente . Trabalhe rapidamente após a adição de TEMED . Encher uma seringa com a solução e dispensar cuidadosamente conteúdos no espaço vazio entre as placas até que a solução é ligeiramente abaixo da placa inferior .
5
inserir cuidadosamente o pente de formação de poços entre as grandes e pequenas placas no topo as placas montadas . Deixe o gel polimerizar completamente por cerca de uma hora.
6
Remova cuidadosamente o pente. Lavar os poços com 1X TBE para os limpar. Tire os grampos e coloque o gel no aparelho de eletroforese de acordo com as instruções do fabricante. O gel de poliacrilamida está pronto para usar para a sua experiência .
