Como validar instrumentos de HPLC
cromatografia líquida de alta eficiência , ou HPLC, é um método comum de análise química instrumental. O método envolve a injecção de uma amostra de líquido para um aparelho de HPLC , em que é realizado ao longo de um fluxo de solvente e separado nos seus componentes químicos que se move através de uma coluna empacotada . A identidade e a quantidade de cada substância química são calculadas a partir de uma resposta do detector . A fim de validar um instrumento HPLC e ter certeza de que está funcionando corretamente, testar cada componente para function.Things adequadas que você precisa
instrumento HPLC com bomba, amostrador automático , coluna, detector e computador de aquisição de dados
padrão da amostra de verificação
Dois solventes de fase móvel
Graduado
cilindro Cronômetro
Pesar escala
Calculadora
Show Mais instruções
Validação de Instrumentação HPLC
1
definir a bomba a uma taxa de fluxo da fase móvel nominal ( por exemplo , 2 mililitros por minuto ) . Coloque a linha de saída de solvente em um cilindro graduado. Inicie o cronômetro e permitir que a bomba para funcionar por um determinado período de tempo. Ler o volume de solvente no cilindro graduado . O volume recolhido deve ser igual à taxa de fluxo multiplicado por o período de tempo para demonstrar a programação taxa de fluxo da bomba está a funcionar .
2
Definir a bomba para produzir uma determinada proporção dos dois solventes de fase móvel . Coloque a linha de saída de solvente em uma pré-pesado cilindro graduado e permitir que a bomba a funcionar até 50 a 100 mililitros de coleta solvente. Ler o volume exacto de solvente no interior do cilindro e , em seguida, pesa-se o cilindro com o solvente . Calcule o peso de solvente dispensado . A partir do peso e as respectivas densidades dos dois solventes puros , calcular a proporção de solventes dispensado para dentro do cilindro . Esta relação deve ser igual à proporção programado na bomba HPLC.
3
Coloque uma amostra de verificação padrão no amostrador automático e configurá-lo para executar , pelo menos, dez injeções repetidas do padrão. A amostra de controlo devem conter um produto químico específico, que o detector de HPLC responde e a concentração do produto químico na amostra deve ser conhecida . Para cada injecção , gravar a saída do detector , incluindo o tempo de retenção do analito e da resposta do detector ( ou altura da área do pico ) . Calcule a média e desvio padrão para todos os tempos de retenção de dez e respostas. Verificar que o desvio padrão em cada caso, é pequeno quando comparado com o valor absoluto do tempo de retenção e um detector de resposta média . Isso permitirá que você para validar a precisão do amostrador automático , coluna e detector.
