Tipos de colunas de HPLC
Cromatografia Líquida de Alta Eficiência ( HPLC ) é um tipo de cromatografia de coluna concebida para separar e classificar os componentes de uma amostra com base na sua interacção com uma coluna específica . HPLC é distinta porque utiliza um ambiente mais pressurizado para propulsionar as amostras de líquido através da coluna densamente agrupadas de forma mais eficiente . Três tipos de colunas de HPLC estão em uso comum hoje em dia; eles diferem na natureza do material de empacotamento da coluna de revestimento e que interage com a amostra . Coluna de troca iônica
experimentadores usar cromatografia de troca iônica na separação de amostras ionizáveis , ou amostras que podem se tornar cobrado. A fase estacionária , que é o material sólido que reveste a coluna e interagindo com a amostra , possui uma carga oposta à da amostra de interesse , de modo a que a amostra será atraído para as paredes da coluna . Esta atração retarda o tempo de eluição ou tempo que leva para passar por todo o caminho para baixo na coluna na fase móvel , da amostra. Os mais cobradas as partículas da amostra são, mais eles serão atraídos para a fase estacionária , resultando em um tempo de eluição mais lenta. Os tempos de eluição representam a força da carga das partículas e, portanto, são o principal meio de classificação dos diferentes compostos dentro da amostra.
Adsorção Coluna
Como o seu nome indica , as funções de cromatografia de adsorção através de uma fase estacionária adsorvente . Adsorção , não deve ser confundida com a absorção , envolve a ligação temporária das partículas da amostra para a fase estacionária da coluna . O grau em que uma amostra de partículas pode adsorver à fase estacionária é determinada pela polaridade relativa , ou carga , que a partícula pode possuir em um determinado momento . Isso varia de cromatografia de troca iônica em que as partículas não são explicitamente cobrada , mas eles são ligeiramente positivo ou negativo , por vezes, como a rotação de partículas e vibra . À medida que a partícula se move para baixo na coluna , que adsorve e DE- adsorve em graus variáveis com base no nível de polaridade que possui. Tempos de eluição fornecer uma medida de nível de polaridade das partículas da amostra.
Tamanho – Exclusão Coluna
cromatografia de exclusão utiliza uma técnica de separação diferente do que de Troca Iônica ou cromatografia de adsorção . Este tipo de coluna é menos comum do que os outros dois, mas é útil quando separando grandes biomoléculas como proteínas ou carboidratos. A fase estacionária é constituído por partículas sem carga eléctrica , que são controladas pelo tamanho e poroso . Quando a amostra é disparado através da coluna , as pequenas partículas de tamanho são temporariamente absorvido pelo revestimento da coluna , enquanto que as partículas maiores, passam directamente através e eluir em primeiro lugar. A fase estacionária é projetado de modo que quanto menor a partícula, mais profundamente no revestimento da coluna penetra , o que significa que as menores partículas terá a maior quantidade de tempo para voltar a superfície e eluição . As amostras podem ser classificadas de acordo com tempo de eluição , o que corresponde diretamente ao tamanho de partícula.
