As propriedades de Taq Polimerase

Taq polimerase , uma enzima mais utilizada na reacção em cadeia da polimerase ( PCR ) , é isolada a partir de Thermus aquaticus . Estes microrganismos thermophillic vivem em fontes termais a temperaturas de 70 a 73 graus C. A polimerase Taq usado hoje é isolado a partir de tensão YT -1, uma cultura de T. aquaticus coletadas de Primavera Cogumelo , um grande mola no Geyser Bacia do Baixo . Propriedades

Full-length Taq polimerase tem 832 aminoácidos e um peso molecular de 94.000 daltons. Possui uma actividade específica de 292.000 unidades , com a adição de cada unidade de 10 nmol de desoxirribonucleótido trifosfato ( dNTP ) num produto em 30 minutos . Taq polimerase foi o primeiro encontrado para manter a sua actividade após exposição a alta temperatura . Mais especificamente , a polimerase Taq tem uma actividade de meia – vida de 45 a 50 minutos a 95 graus C e de 9 minutos a 97,5 graus C.

Actividade

O ideal actividade de polimerização de Taq é a temperaturas de 80 ° C , na presença de KCI 55 mM e MgCl2 2 mM e um pH de 9,4 .

Aplicação

o factor mais importante que contribui para a popularidade da polimerase Taq em PCR é a sua capacidade para funcionar no e suportar uma temperatura elevada . Esta propriedade tornou ideal para a PCR , o que requer uma alta temperatura para desnaturar o DNA de cadeia dupla . A PCR é composta de cerca de 40 ciclos , e a temperatura de cada ciclo varia entre cerca de 50 a 95 graus C. de Escherichia coli ( E. coli), a polimerase de ADN , utilizado para a PCR , antes do isolamento de Taq , foi destruída com o elevado temperatura e tinha de ser reabastecida após cada passo de desnaturação . Isso aumentou a taxa de erro e as chances de contaminação cruzada na PCR. O uso de Taq polimerase em PCR tem não só simplificou a técnica mas também melhorou a sua especificidade , sensibilidade e rendimento . Por causa de seu uso difundido e importância no campo da biologia molecular , “Ciência ” da revista chamada Taq polimerase ” Molécula do Ano” em 1989.

Limitação

A exonuclease capacidade de revisão está ausente em Taq polimerase. Isto significa que a Taq tem baixa fidelidade de replicação , uma vez que não pode corrigir erros que podem ocorrer durante a amplificação . Esses erros limitar o uso de Taq polimerase , onde é necessária alta precisão.