Como identificar um carboidrato Através de reagente Bradford

Stains estão disponíveis para identificar quantidades e tipos de hidratos de carbono em uma solução. Reagente de Bradford , tradicionalmente , é usado somente para quantificar a quantidade de proteínas em solução . No entanto, existem dois casos específicos em que você poderia usar o reagente Bradford para identificar carboidratos: quando os carboidratos estão na forma de glicoproteínas – em outras palavras , açúcares ligados a proteínas – e quando você sabe que a sua solução consiste inteiramente ou de carboidratos ou proteínas, e quero confirmar que não contém proteins.Things você precisa placas Ensaio

espectrofotômetro

Bradford kit de coloração

materiais para manipulação de líquidos do laboratório padrão

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Quantificar Glycoproteins

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Aqueça o espectrofotômetro , deixando -a por pelo menos 15 minutos antes de começar a usá-lo.

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Prepare pequenas amostras que ter conhecido concentrações de glicoproteínas ou ” padrões conhecidos. ” Comece suas concentrações tão elevadas como 100 micrograma de glicoproteína por mililitro (ml) de água destilada , e para cada padrão subsequente , diluir a concentração de metade; ou seja , 50 microgramas /ml, 25 microgramas /ml .

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Adicione corante reagente Bradford e Brilliant Blue G do seu kit de ensaio de Bradford para cada padrão conhecido. Deixe-o sentar-se e reagir por cinco minutos.

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preparar a amostra para o qual você deseja quantificar a sua concentração glicoproteína. A amostra deve conter entre cinco e 100 microgramas de glicoproteína por ml. Adicionar corante reagente Bradford e Brilliant Blue G.

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Coloque a placa de ensaio contendo normas e incógnitas em espectrofotômetro. Para os padrões , obter uma curva de calibração , gráficos de absorção versus concentração conhecida . Esta curva , para a gama de concentrações utilizadas tal como anteriormente mencionado , deve ser linear . Calcular uma equação linear para descrever a sua curva.

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Ligue os seus valores de absorbância para a sua amostra conhecida na equação linear obtida na etapa anterior. Calcular a concentração da glicoproteína de sua amostra.

Utilizando Reagente Branford para confirmar uma solução consiste de carboidratos

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Adicione corante Bradford e Brilliant Blue G para a amostra desconhecida no placa de ensaio .

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Adicione corante Bradford e Brilliant Blue G para outro poço da placa de ensaio , sem adicionar nenhum soluções conhecidas ou desconhecidas.

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Leia a placa de ensaio no espectrofotômetro, em 465 e 595 nm . O corante de Bradford único poço que contém e Brilliant Blue G deve ter a absorvância do pico – o comprimento de onda em que a absorção é máxima; isto será exibido pelo seu software espectrofotômetro automaticamente – . de 465

Para a amostra desconhecida, se ele contém proteínas , o pico máximo de absorção ocorre em 595 nm. Se, por outro lado, sua amostra é constituída principalmente de carboidratos, proteínas e não , como o corante Bradford só bem conter e Brilliant Blue G, seu pico de absorção ocorre em 465 nm.