Técnica Northern Blotting

técnicas de transferência do norte são uma maneira de determinar as diferenças entre a composição genética de amostras biológicas em um ambiente de laboratório . Essas técnicas são úteis na pesquisa do câncer , biologia molecular e identificação genética entre as espécies. Estas técnicas requerem hardware especializado , mas eles não estão além do nível de habilidade dos alunos do ensino médio avançados. Passos iniciais

A chave para esta técnica é a obtenção de um ácido ribonucléico puro (RNA) da amostra. Há uma série de maneiras de fazer isso , dependendo do tamanho do RNA , o nível de pureza desejado e os equipamentos que você tem na mão. Depois de ter sua amostra de RNA , misturá-lo com um corante e colocá-lo em uma folha de eletroforese em gel de agarose . Fazer passar uma corrente através do gel . O RNA vai migrar toda a folha de gel de uma maneira particular que indica as suas características . Em seguida, colocar uma membrana de nylon sobre o gel e cobri-lo com um material absorvente ( tal como as toalhas de papel ) e peso dele. Este é o lugar onde o nome de ” mancha ” vem. O RNA tingidos é fixa na membrana.

Radioativo Labeling

Para ver a posição dos vários pedaços de RNA na membrana , incubar a membrana com rótulos radioativos. Rótulos radioativos são escolhidos de acordo com o que determinada seção de RNA que você está investigando . Após o período de incubação , colocar a membrana sobre uma folha de película de raios – X; os rótulos radioativos irá expor o filme , criando uma imagem do que é na membrana. Uma vez que o filme é revelado , você tem uma imagem da posição relativa das seções de RNA que você deseja examinar.

Resultados

Interpretando os resultados da northern blot é um passo separado . Você pode comparar seu amostra de RNA para outras amostras de RNA conhecidos para identificar e quantificar o RNA que você tem. Os investigadores do cancro muitas vezes comparar o RNA das células cancerosas antes e após o tratamento de quimioterapia para determinar os efeitos de medicamentos de quimioterapia a determinados tipos de câncer. O teste norte blot é relativamente barato , de fácil execução e fornece grande utilidade na pesquisa científica.