Procedimentos de cultura de tecidos
A cultura de tecidos é o processo pelo qual as células individuais são cultivadas em laboratório , para além do organismo que se originou a partir de . A cultura de tecidos é usado para propagar as linhas de células e manter o crescimento de células de modo a que as condições experimentais pode ser testado . Alunos e técnicos de laboratório são mais comumente atribuída esta tarefa , porque é bastante fácil de fazer . Se um laboratório é grande o suficiente , haverá uma pessoa encarregada de cultura de células para que a contaminação pode ser evitada. Tipos de células e linhas
As células utilizadas para cultura são descritos por origem e forma de crescimento. As células primárias vir directamente a partir de um organismo vivo e podem ser provenientes de qualquer órgão . Estas células são difíceis de cultura , porque eles têm uma capacidade limitada para dividir , tornando a sua expectativa de vida curta. Linhagens celulares finitos também vêm diretamente de tecidos animais e são difíceis de se propagar. Estas células podem ser cultivadas ao longo de várias gerações e para que durem mais do que linhas primárias diretas. Linhagens de células contínuas vêm de uma ação chamada de transformação pelo qual sua genética mudaram espontaneamente na cultura . Estas células são fáceis de propagar , porque eles têm uma vida útil quase indefinido , no entanto, eles não são tão representativos do organismo original devido a esta mudança.
Obtenção de pilha Stock
as células primárias devem vir diretamente do organismo vivo . Por exemplo, se você está estudando as glândulas mamárias do rato , o rato deve ser sacrificado , o tecido mamário isolado , e as células separadas e cultivadas em placas de cultura . Isto é dispendioso e demorado, mas dará uma indicação mais precisa da aplicação na vida real . A maioria das células plaqueadas após isolamento morrerão dentro de 48 horas de cultura tantas ratinhos são necessários para obter um grande número de placas saudáveis . Se você não tem o animal necessário para obter as células , você terá que pesquisar outro laboratório que está a trabalhar no mesmo tipo de projeto e ver se eles podem poupar algumas células para você. As linhas celulares pode ser encomendado a partir de empresas de fornecimento de biológicas ou obtidos a partir de um outro laboratório que você trabalha.
Células Cultivar
O método de cultura de células será diferente para cada tipo celular; no entanto, existem algumas regras gerais para aprender a ser bem sucedido. A maioria das células são mantidos congelados assim que a primeira tarefa é a de descongelar as células fora. Se você tem pilhas , é imperativo que você aprender a cultura deles a partir de uma outra pessoa que é muito experiente nessa linha celular particular. As linhas celulares geralmente vêm com um protocolo a seguir. Células congelados devem ser descongelados de um banho de água quente de 37 graus C rapidamente , a fim de evitar a morte celular desnecessária . Além disso , o meio de crescimento que é utilizado nas placas também deve ser aquecido antes de ser utilizado . Após descongelação , a transferência das células para um prato de cultura com a quantidade prescrita de meio nutriente e incubar durante 24 horas. Este período de tempo permite que as células para manter o fundo do prato para que a mídia possa ser removido no dia seguinte e substituído por meio fresco .
Observação e Manutenção
Monitore suas células diariamente , olhando para eles sob o microscópio. Procure sinais de fracasso , como muitos vagabundos . Flutuadores são células mortas que já não aderem ao fundo da placa . Use a ponta de sucção na capa de cultura de tecidos para evacuar a mídia e as células mortas e , em seguida, atualizar com novas mídias. As células saudáveis devem replicar e espalhar-se à medida que amadurecem na incubadora. Quando o fundo da placa é quase totalmente coberta com células , é o tempo de separá-los . Cada laboratório terá um protocolo específico a seguir , mas em geral, isto é feito por lavagem das células com uma solução tampão e em seguida, separar as células a partir da parte inferior da placa utilizando uma pipeta e meios de comunicação ou raspagem . Se estiver usando mídia , em seguida, encher a pipeta com a mídia e , em seguida, pressione-a firmemente para baixo na parte inferior da placa e liberar o líquido. A enxurrada de líquido da pipeta vai desalojar as células e suspendê-las na mídia . Se raspar , use o raspador de células indicada no protocolo de suspender as células. Transferir este suporte suspensa de células para novas placas que foram previamente preparadas e incubar durante 24 horas. Se você encontrar-se com muitos pratos cheios de células, eles devem ser usados ou congelados .
Contaminação
A contaminação é um problema sério em cultura de tecidos. Muitas semanas de trabalho pode ser arruinado com a introdução de bactérias na incubadora . Os sinais de contaminação na sua cultura de tecidos incluem mídia nublado , a observação de células aglomeração sob o microscópio , a morte inexplicada, ou um cheiro estranho . Sempre faça sua cultura de tecidos em uma capela de fluxo laminar projetado especialmente para a tarefa. Não use uma garrafa de mídia para mais de uma linha celular. Não têm dois tipos de células diferentes sob o capô , ao mesmo tempo . O ideal é que você não deve mesmo ter mais de um tipo de célula em cada incubadora , mas às vezes isso pode ser impraticável . Se você deve compartilhar, mantém placas o mais longe possível uns dos outros e sempre se certificar de sua incubadora está limpo.
