Como para permeabilizar células THP – 1

THP – 1 é uma linha celular de leucemia monocítica aguda humana , que foi originalmente obtida a partir de um 1 – year-old criança do sexo masculino . A linha celular é usado para a pesquisa científica , e pode ser permeabilizadas com alguns passos simples . Permeabilização é um processo essencial se você quiser detectar antígenos intracelulares em sua linha celular THP- 1. Detergentes , tais como saponina , Triton X – 100 e Tween – 20 , são reagentes de permeabilização comuns , que ajudam a fazer buracos na membrana da célula THP – 1 . O tempo exacto de permeabilização e concentração do reagente depende da experiência . Siga sempre as instruções do seu protocol.Things específicas que você precisa

lamelas de Poli- L- lisina

10 por cento formaldeído

detergente , como Triton X-100

salina

Phosphate -buffered Pipettes

pipetas dicas

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um

Cultura as células THP-1 sobre uma lamela de poli -L- lisina a 10.000 células por mililitro , ou a uma concentração recomendada pelo seu protocolo .

2

Fixar as células com uma solução de formol a 10 por cento por uma hora, ou um período de tempo recomendado pelo seu protocolo . Opcionalmente , fixar as células após permeabilização

3 Lavar as células com solução salina tamponada com fosfato três vezes mergulhando as lamelas numa solução de PBS . .

4

permeabilizar as células THP-1 com 0,5 por cento de Triton X-100 a solução por 25 minutos , ou uma solução de saponina a 0,05 por cento durante 20 minutos à temperatura ambiente . Fazer a 0,5 por cento de Triton X-100 a solução por adição de 500 microlitros de 10 por cento de Triton X – 100-9500 microlitros de PBS . Adicione a solução de saponina a 0,05 por cento pela adição de 500 microlitros de uma solução de saponina a 1 por cento em 9500 microlitros de PBS .

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Lavar três vezes com PBS . As células THP-1 estão agora permeabilizadas e pronto para bloqueio e incubação com o anticorpo .