Como identificar Enterobacter Aerogenes API 20E
aerogenes e outras espécies de Enterobacteriaceae são fáceis de identificar usando o kit de teste de API -20E . Este kit , fabricado por bioMeriuex Inc. , inclui 20 mini- tubos ou poços de teste . O ensaio consiste na inoculação de uma suspensão bacteriana pura para as cavidades de teste e ler as reacções de cor que ocorrem . Identificação depende de converter os resultados destas reacções de cor para um código de sete dígitos conhecido como o índice de perfil analítico . Combinando este código com dados do fabricante fornece uma identificação das organism.Things você precisa
Enterobacter aerogenes cultura pura
ampola contendo 5 ml de cloreto de sódio 0,85 por cento médio Pipeta
caixa Incubação
> desmineralizada ou destilada
óleo mineral
Incubadora telefone
Toque – tom
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um
Isolar o organismo que pretende identificar em uma cultura específico médio para Enterobacteriaceae . Use o kit de teste API 20E apenas com culturas puras e não diretamente em espécimes misto de cultura .
2
Abra uma ampola contendo 5 ml de cloreto de 0,85 por cento médio de sódio. Remover uma única colônia de um 18 – a placa de isolamento de 24 horas de idade, com uma pipeta , e adicioná-lo na ampola. Misturar até se obter uma suspensão homogénea . Use esta suspensão assim que terminar sua preparação.
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Configurar uma caixa de incubação , que consiste de poços honeycombed em uma bandeja com tampa . Abra a caixa e adicionar 5 ml de água desmineralizada ou destilada para os poços de bandeja. Retire a tira fornecido no kit de teste API 20E , e coloque-o na caixa de incubação.
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Encha o tubo ea cúpula dos poços marcado ” GEL “, ” VP ” e ” CIT ” com a suspensão que você preparou. Nos restantes poços , preencher a suspensão bacteriana no interior do tubo , mas não à cúpula . Adicione o óleo mineral nos poços marcado ” ADH “, ” ODC “, ” PMA “, ” URE ” e ” H2S ” para criar um ambiente anaeróbico .
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Cubra a caixa de incubação com a tampa, e incubar a uma temperatura entre 34 e 38 graus Celsius por 18 a 24 horas.
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observar os poços , e observe as reações na folha de resultados. Desde um mínimo de três testes forem positivos , prossiga para as reações de cores usando as soluções de teste de química, ou reagentes , que acompanha o kit. Adicione uma gota de reagente TDA para o bem marcado ” TDA ” e uma queda de cada um dos reagentes e VP1 VP2 em bem marcado ” VP “. Se menos de três testes saiu positivo , incubar as tiras para mais 24 horas antes de adicionar estes reagentes .
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Observe as mudanças de cor produzidas nos poços. A cor marrom avermelhada em TDA indica uma reação positiva. Espere por 10 minutos após a adição de reagentes do kit em VP1 e VP2 . Considere uma cor vermelha ou rosa como positivo e uma cor rosa pálido aparecem após 10 minutos como negativos.
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Adicione uma gota de reagente JAMES do kit de teste para o bem marcado ” IND. ” Considere uma cor rosada em toda a cúpula como uma reação positiva.
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Realize o teste de oxidase , conforme especificado pelo fabricante do kit , e registrar seus resultados , juntamente com os resultados dos 20 testes anteriores.
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Use tabela de leitura fornecido com o kit de teste para atribuir valores para as reacções observadas em cada um dos poços de teste . Adicionar esses valores como prescrito para obter o número do perfil de sete dígitos .
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Alimente este número de perfil de sete dígitos na base de dados do fabricante do kit através de um telefone de teclas . Esperar para receber a identificação fornecido pela base de dados . Se o número do perfil não fornece resultados específicos , realizar os testes complementares especificados pelo fabricante do kit .
