Maneiras de medir a concentração celular

Para muitas aplicações biológicas e clínicas, é necessário determinar a concentração celular em uma amostra . Existem vários métodos estabelecidos para determinar as concentrações de células , as quais incluem a diluição em série , a densidade óptica e a contagem manual usando um hemocitómetro . Qualquer destes métodos pode ser usada para determinar as concentrações das amostras biológicas ou para realizar a contagem de sangue a partir de amostras clínicas . Contando Secção

Uma câmara de contagem pode determinar a concentração de células em suspensão de um líquido . Este dispositivo é também conhecido como um hemocitómetro , como foi originalmente desenhado para contar o número de células de sangue numa amostra clínica . As amostras são carregadas para um bem , colocado sob uma objectiva microscópica e as células são contadas manualmente contra um fundo com uma grelha em forma de V . Em resumo , as células em vários quadrados da grade são contadas e o tamanho total da amostra que pode ser calculado para a totalidade do volume .

De Diluição em Série

Normalmente, as culturas pode conter milhões de células por mililitro . Em uma série de diluição , um volume medido de suspensão de células é retirado a partir de um tubo contendo a concentração inicial e transferido para outro tubo de ensaio carregado com um volume pré-medido de líquido . Por exemplo , remover um mL do tubo original e colocar em um segundo tubo contendo nove mL de solvente líquido . Isto representa uma diluição de dez vezes . Repita esse processo até que um número limitado de células disponíveis para contadas usando um hemocitômetro .

Densidade Óptica

luz diminui à medida que passa através de qualquer meio , tal como uma suspensão líquida contendo células . Com base nesta característica , é possível medir as células por densidade óptica (DO ) , ou a mudança na luz emitida e detectada . A quantidade de luz dispersa pela suspensão celular , medido em um aparelho chamado um espectrofotómetro , pode ser interpretado para representar a concentração de células . As leituras são determinados em certos comprimentos de onda de luz , medidas em nanómetros (nm) , e são referidos , por exemplo , como a 600 nm . A leitura de OD é inversamente proporcional à concentração . Em outras palavras , quanto menor for a leitura OD , quanto maior for a concentração de células .

Microscopia

Usando um microscópio para determinar a concentração de células é bastante trabalhoso e frequentemente imprecisa . Concentrações celulares primeiro terá que ser diluído pelo método de diluição em série explicado anteriormente. Um volume conhecido de solução celular é então montado sobre uma lâmina e as células são contadas manualmente contra uma grade para adquirir uma estimativa da amostra . Ao utilizar este método , é importante para manter a amostra bem misturada de modo a que as células não assente no fundo do tubo . Se isso ocorrer , haverá uma grande discrepância no número de células a partir da camada superior da amostra em comparação com as camadas inferiores .