Como combinar as peças de duas estruturas proteína diferente

Você pode cruzar -link , ou fazer ligações químicas para formar entre duas estruturas de proteínas diferentes. A ligação cruzada pode fornecer informações sobre a identidade de duas proteínas diferentes , bem como as regiões em que eles formam ligações . O processo de cross-linking é bastante simples , envolvendo o tratamento de proteínas em soluções tampão com agentes de reticulação que o vínculo a grupos funcionais das proteínas . A medida em que uma proteína se liga a um agente de ligação cruzada , induzindo mudanças conformacionais na proteína , fornece informações valiosas sobre o número de sítios de ligação que a proteína tem e como resposta as proteínas são a agents.Things de ligação que você precisa

solução tampão, tampão ou seja fosfato pH 7,5

tubos Eppendorf

glutaraldeído ou outro agente de ligação cruzada de escolha

Micropipetas

Tris -HCl

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1

Criar uma solução de volume total de cerca de 100 microlitros . Pipeta de 50 a 100 microgramas de proteínas que interagem em um Eppendorf contendo 20 mM de tampão de fosfato .

2

Adicionar 5 microlitros de 2,3 por cento de glutaraldeído , por meio de pipetagem , de dois a cinco minutos. Incubar solução a 37 graus Celsius .

3

Terminar a reacção de reticulação por adição , por meio de pipetagem , 10 microlitros de 1 M de Tris – HCl , pH 8,0 .