Fontes de erro em Gel Eletroforese

electroforese em gel é usado em laboratórios para classificar e mensurar proteínas ou ácidos nucléicos. Após cuidadosa preparação , as amostras são carregadas para uma das extremidades do gel , uma corrente eléctrica é aplicada , e as amostras analisadas para a extremidade positiva do tabuleiro . Como com qualquer procedimento científico , a possibilidade de erro humano e outras fontes de erro existe e deve ser levada em consideração na interpretação dos resultados . Contaminação da amostra

luvas ajudará a proteger você e suas amostras.

Tudo o que você está medindo , o primeiro passo para a obtenção de resultados precisos é uma amostra não contaminada. Tomar medidas para evitar a contaminação durante o preparo usando luvas , usando apenas recipientes estéreis , e mudar a sua ponta da pipeta após cada utilização. Também tome cuidado para não contaminar a sua pipeta puxando sua amostra passado a ponta .

Problemas Gel

Medidas cuidadosas ea concentração adequada para o seu gel são fundamentais.

Muitos erros derivam de problemas com o gel . Primeiro, uma concentração de gel incorreto pode resultar em amostras que executam muito rapidamente ou não. Certifique-se de que você está usando uma concentração que é medido corretamente e voltado para as dimensões gerais da amostra que você está tentando medir. Por exemplo, quando você olha para uma amostra de DNA , um gel de 0,7 por cento que lhe permitem resolver eficazmente os fragmentos que estão em qualquer lugar de 800 a 10 mil pares de bases de comprimento , enquanto que fragmentos menores , seria necessário um maior percentual de gel .

Gel pode ser comprometida por outros meios . Antes de colocar as suas amostras , certifique-se que o gel não tem cortes ou bolhas. Mesmo uma pequena imperfeição pode afetar seus resultados. A preparação adequada do gel é fundamental. Siga todas as instruções , despeje lentamente para evitar borbulhante , e deixe o seu gel esfriar completamente antes de carregar suas amostras. A matriz molecular do próprio gel e a capacidade da sua amostra para navegar através desta matriz para a extremidade de carga positiva do tabuleiro são o que demonstra o tamanho da amostra . A ruptura física ou até uma temperatura que é muito radical afetará essa matriz molecular e comprometer a validade de seus dados.

Finalmente, quando definir a sua gel você vai colocar um pente para criar os poços onde você vai carregar seu amostras . Tome cuidado para que este pente é colocado corretamente nas inserções de bandeja , porque um pente que cria poços que são demasiado profunda ou superficial pode levar a erros . O pente não deve atingir completamente o gel para o fundo da bandeja , mas deve criar poços a uma profundidade suficiente para carregar suas amostras sem transbordar .

Inadequada Carregando

Embora pareça bastante simples , carregando suas amostras em pequenos poços no gel pode ser difícil. O mais importante , certifique-se que você sabe o quanto a colocar em cada poço. Muito de sua amostra poderia causar-lhe a mancha ou parecer menor do que realmente é; muito pouco da sua amostra pode ser impossível de se ver. Além disso, não perfurar o gel durante o carregamento de suas amostras , pois isso pode causar problemas assim como outras imperfeições de gel.

Elétrica Problemas atual

Steer clara de tensão que é muito alto .

Um erro comum para os alunos novos para a técnica de eletroforese em gel está executando o gel para trás. Isto acontece quando as ligações positivas e negativas estão ligados às extremidades erradas do tabuleiro . Você pode evitar este erro , lembrando que a amostra vai sempre correr para o vermelho, por isso certifique- se de que o pólo positivo está ligado no lado oposto do tabuleiro dos poços de amostra.

Problemas também podem ocorrer com o uso de incorreto tensão . A tensão que é muito elevado pode fazer com que a amostra de correr para fora da outra extremidade do gel , enquanto que é muito baixo pode significar a amostra vai demorar muito tempo para executar ou não correr para longe o suficiente para ser quantificado utilmente . O posicionamento incorreto da bandeja dentro da atual ou interrupções na corrente pode causar a amostra para correr na diagonal ou de forma inconsistente , que pode fazer uma medição precisa difícil.

Visualization Falha

Se você não pode ver os resultados , você obviamente vai ter dificuldade para interpretá-los . Um exemplo que é demasiado pequeno pode ser difícil de visualizar. Problemas com os métodos de visualização também pode comprometer os resultados. Os métodos mais comuns usam corantes visíveis ou brometo de etídio ( para visualização sob luz ultravioleta ) . Estes devem ser adicionados ao gel nas concentrações corretas, ou visualização pode ser prejudicada.

Variadas de medição

A precisão de suas medidas serão afetados por seus instrumentos.

medição variada é uma fonte amplamente aceita de erro na eletroforese em gel de que os estudantes muitas vezes ignoram . Quando você medir o comprimento do gel que sua amostra viajou , seu governante será limitado em precisão , provável que um milímetro. Quando sua medida parece estar entre milímetros, você não será capaz de especificar a medida exata . Além disso , as bandas formadas por electroforese pode variar em espessura . Vocês mediram a parte superior ou inferior da banda em cada coluna ? A consistência é importante , mas a medição para a extremidade da faixa de mais distante a partir do poço é mais comum . Tenha em mente que esta fonte de erro também provavelmente afetou sua quantidade da amostra e as concentrações de outros componentes em seu experimento.