Como desenvolver um anticorpo

Os anticorpos são moléculas produzidas pelas células brancas do sangue , chamadas de células B , contra antígenos diferentes. Antígenos são moléculas que são estranhos a seu próprio corpo. Suas células B podem responder a um antígeno e produzir um anticorpo específico contra ela. Os anticorpos são moléculas importantes do seu sistema imunológico e ajudam a eliminar agentes patogênicos causadores de doenças e toxinas do seu corpo. Os anticorpos também podem ser feitos em laboratório e utilizado em várias aplicações médicas e científicas . Mais vulgarmente , esses anticorpos são produzidos em um rato ou uma ratazana contra um antigénio específico . Você pode desenvolver um anticorpo contra um antígeno com poucas steps.Things desafiadoras que você precisa

Antigen

Ratos

As células de mieloma

meio de cultura e outros produtos químicos

tecido placas de cultura e outros equipamentos de laboratório

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1

Preparar a quantidade correta do antígeno você quiser fazer o anticorpo contra . O seu antigénio pode ser uma célula inteira , uma proteína ou uma molécula de hidrato de carbono . De acordo com um artigo publicado em ” Molecular Pathology ” , 50 a 100 mcg de proteína ou dez milhões de células , deve ser suficiente para imunizar um ratinho . Você também pode precisar usar um adjuvante , especialmente se o antígeno é pouco imunogênica

2

injetar proteínas por via subcutânea – . Sc – e as células intraperitoneal – IP – para o mouse. Dar uma injecção de reforço após alguns dias ou semanas e siga os títulos de anticorpos usando cauda sangra. Uma vez que você pode detectar os títulos de anticorpos , retire as células B do baço de ratinho usando métodos de assepsia e humanas .

3

fundir o baço células B de rato com células de mieloma , histocompatibilidade negativos HGPRT , por mistura das células com um agente de fusão , tal como polietileno glicol . As células B de mieloma – baço resultantes são chamadas hibridomas ou células híbridas .

4

Placa as células híbridas em poços de cultura de tecidos e começar a selecionar contra células de mieloma não fundidas . Use de um meio selectivo que contém hipoxantina , aminopterina e timidina , também conhecido como HAT. Todas as células de mieloma não fundidas vai morrer durante esta seleção e só hibridoma ou células secretoras de anticorpos vai sobreviver.

5

Examine as células de crescimento com um microscópio e gravar mal crescente , hibridomas emergentes e estabelecidos. Um ter estabelecido linhas de células de hibridoma , transferi-los para maior placa de cultura de tecidos. Dentro de 30 dias , mude o meio HAT ao HT médio para terminar o processo de seleção.

6

Tela hibridomas estabelecidos para a produção de anticorpos por ensaio ELISA e continuar com uma linha de células que mostra a maior produção de anticorpos. Também cyropreserve suas linhas de células de hibridoma melhor que produzem e armazenam em nitrogênio líquido

7

Purifique seu anticorpo do meio de crescimento usando uma cromatografia de afinidade como a proteína A cromatografia líquida de alta performance – . . HPLC