Como calcular Relativa Expressão Gênica

Quando dois organismos pais , não importa a espécie , criar um novo organismo, ambos os pais contribuem material genético. Quando os genes combinar informação , o resultado é a formação de proteínas ou RNA funcional ( ácido ribonucleico ) , dependendo do tipo de gene . Para quantificar a expressão relativa de um gene progenitor específico no produto acabado , seria necessário testar a quantidade do referido gene numa amostra experimental em relação à quantidade de um mesmo gene numa amostra de controlo ou de calibração . Instruções

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Escolha uma amostra de calibrador para servir como linha de base. Se você estiver procurando por um determinado produto codificado gene ou RNA específico, então você deve escolher um órgão ou organela , que terá a menor quantidade de produto. Se você está à procura de mRNA c- myc humano , por exemplo, usar amostras de cérebro como calibradores .

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Reúna seus dados de sua amostra e seu calibrador. Este processo pode variar amplamente , tendo em conta a grande diversidade de espécies que passam para baixo a codificação genética de uma geração para a seguinte. No exemplo da amostragem humano, você obteria amostras de órgãos a partir de uma casa de fonte científica e aplicar o reagente específico para esse órgão. Após o reagente reage com o seu exemplo , você vai ficar com um valor de concentração para que a amostra , e outro valor para a amostra de calibração.

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Gerar uma planilha usando o Microsoft Excel que tem a colunas seguintes : Tipo de amostra , nanogramas de RNA alvo , o logaritmo do que o valor de nanogramas , e o ciclo de limiar , também conhecidos como C ( t ) . Este último valor indica o ponto no qual a amostra dá o suficiente de um sinal de fluorescência a ser detectado . Quanto menor esta C (t) o valor , maior a concentração do RNA que você está procurando.

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Use o logaritmo dos nanogramas eo ciclo limite como seu valores de xey em um gráfico de dispersão XY , usando o assistente de gráficos no Excel.

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Selecione um dos pontos de dados de forma aleatória e clique sobre ele . Em seguida , vá para ” Inserir” e ” Trendline ” para executar uma linha através desse ponto. Vá em ” Type” e escolha ” Regressão Linear “.

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Escolha “Options” e , em seguida, marque as caixas ao lado de ” Equação de exibição em Chart” e “Display Valor R- Squared na carta . ” Esta carta vai lhe dar uma curva com a expressão gênica relativa, mostrando-lhe a concentração relativa do RNA em cada amostra.