Como eu crio Primers
? Pesquisa genética tem sido impulsionado pelo advento da replicação do DNA automatizado , em que a enzima DNA polimerase une novas bases de DNA para fios crescentes de DNA replicado. Esta enzima requer primers , ou cadeias curtas de DNA, como pontos de partida para as novas cadeias de DNA . Distância do Sítio de Interesse
Polymerase Chain Reaction , um processo automatizado para a replicação do DNA , é mais preciso 80 a 150 bases de distância do local primer. Como resultado , os iniciadores devem ser concebidos com base na sequência de ADN que é 80 a 150 nucleótidos , ou bases , para longe do local de interesse .
Adequada Comprimento , Derreter e Composição Nucleotide
iniciadores são mais eficazes quando são de 18 a 30 nucleótidos de comprimento , e de preferência de 20 a 25 nucleótidos de comprimento . A temperatura de fusão deve situar-se entre 131 e 167 graus Fahrenheit . A composição de nucleótidos deve ser de 40 a 60 por cento de GC , guanina e citosina . Para melhores resultados , use um programa de computador para esta etapa do projeto primer.
Self- Annealing Primer Seqüências
A cartilha vai temperar , ou ligamento, para as sequências que são complementares ao iniciador . Porque quer o iniciador para hibridar com a sequência de ADN de interesse , que é importante para evitar os iniciadores que são complementares para si . Se primers são auto- complementares que irão fundir com outras cópias do cartilha e não à cadeia de DNA .
