Como melhorar Gel de Filtração

de filtração em gel é uma técnica cromatográfica que é usado para separar as moléculas em uma mistura com base no seu tamanho de partícula . Quando uma amostra é aplicada a uma coluna cheia com o meio de filtração em gel , as moléculas mais pequenas na amostra movem no interior dos poros do meio de filtração . As moléculas que são maiores do que este tamanho de poro não pode difundir-se para o meio e passar através da coluna , aparecendo primeiro no líquido eluído a partir da coluna . Resolução – o grau de separação dos componentes da mistura – depende de vários fatores , tais como o volume da amostra, natureza da coluna de filtração e sua gama de fracionamento . Instruções

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Selecione um meio de filtração apropriado , dependendo da natureza de sua amostra. Escolha mídia com uma gama de fracionamento que abrange os pesos moleculares dos componentes presentes em sua amostra. Se muitos meios de comunicação têm intervalos de fracionamento semelhantes , selecione aquele com a curva de seletividade mais íngreme para alcançar a melhor resolução .

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Use várias colunas acopladas em uma série para aumentar a altura do leito eficaz. Isto assegura uma separação mais eficiente , desde que todas as colunas de conter o mesmo meio de separação .

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determinar o volume da amostra exacta a ser utilizada . Geralmente , este não deverá ser maior do que 2 por cento do volume total da coluna. Comece com um volume de 0,5 por cento e realizar execuções de teste de aumentar os volumes de amostra para encontrar o valor que produz melhor resolução. Evite o uso de volumes de amostras com menos de 0,5 ml por volumes baixos prejudicar resolução.

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Concentre amostras antes de aplicá-las para a coluna de filtração em gel . Isto melhora o grau de separação; no entanto, garantir que você use concentrações inferiores a 70 mg /ml com amostras de proteínas para evitar a interferência devido aos efeitos da viscosidade.

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Degas buffers você precisa usar na separação , filtrando -os sob um vácuo . Se bolhas de ar entrar na coluna de filtração , eles afetam o desempenho da coluna.

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Use a menor taxa de fluxo possível para evitar alargamento do pico . Picos largos produzir resultados que não são tão precisos como os estreitos.