Manchas usados ​​em coloração negativa

coloração negativa em microscopia eletrônica de transmissão é um procedimento útil na visualização de estruturas muito finas em uma amostra. É geralmente usado para examinar macromoléculas tais como as proteínas celulares , membranas celulares , organelos celulares e vírus individuais . Neste método , uma mancha de metal pesado é depositado em torno da amostra a ser observada . Uma mancha negativa ideal é aquele que não se liga fortemente com o modelo causando distorção das características estruturais . Soluções uranilo Acetato

Uranly acetato com um pH entre 4,2 e 4,5 são úteis na coloração diferentes tipos de amostras microbianas , com boa resolução. Uma solução de 1 a 3 por cento é preparada , filtrada através de um filtro de 0,22 micron , e armazenados a 4 graus Celsius no escuro . Quando armazenada desta maneira , a mancha mantém durante pelo menos um ano . Acetato de uranila dá um bom contraste de imagem e produz uma imagem de granulação fina que ajuda a visualizar pequenas partículas com maior clareza . Embora esta solução também pode ser usada com o vírus , que não deve ser utilizada com as amostras que não podem suportar condições ácidas .

Ácido fosfotúngstico e seus sais

uma solução neutra de ácido fosfotúngstico a uma concentração de 1 a 3 por cento é útil quando a coloração vírus que são instáveis ​​em condições ácidas . Os sais de sódio e de potássio do ácido fosfotúngstico são muitas vezes utilizados , porque a sua actividade não é afetado por formulações de meios biológicos. No entanto, estes sais podem danificar certos vírus e sua reação com lipoproteínas da parede celular pode causar uma aparência de fibras finas .

Amônio Molibdato

amônio molibdato é usado na coloração de organismos que são sensíveis a alterações na pressão osmótica . A solução neutra , a uma concentração entre 1 a 2 por cento é utilizado na maioria dos casos . No entanto, deve ser tomado cuidado para evitar pH subir acima de 7,0 , pois leva à cristalização do molibdato de amônio , que interfere com a visualização de espécimes.

Metilamina Tungstate

ácido fosfotúngstico e os seus sais de sódio e de potássio tendem a prejudicar certas estruturas frágeis dos espécimes que mancham . Este efeito pode ser evitado pelo uso de metilamina tungstato como um agente de coloração negativa para fornecer razoavelmente boa resolução . Uma solução de 2 por cento a um pH de 6,5 é geralmente utilizado . A desvantagem de usar essa mancha é que ela deve ser preparada antes de cada coloração porque degrada muito rápido no armazenamento.

Stains negativos raros

Stains como uranyl oxalato , formato e sulfato, thioglucose ouro, zircônio glicolato de sódio e formato de alumínio são manchas negativas que são ocasionalmente usados ​​para manchar alguns amostras com requisitos específicos.